Определение резус-фактора плода. Особенности определения резус-фактора и пола плода по материнской крови методом ПЦР, кому показан и когда его можно проводить

Резус-фактор - это белок, который находится на поверхности эритроцитов человека. Когда этот белок отсутствует, говорят, что резус-фактор у человека отрицательный. 15% людей имеют отрицательный резус-фактор.

Резус-фактор учитывается, когда при большой кровопотере необходимо переливание донорской крови. Если у реципиента резус отрицательный, а у донора положительный, то его эритроциты с резусом, попав в организм, воспринимаются его иммунитетом как чужеродные. В ответ начинают образовываться антитела, под действием которых эритроциты выводятся из организма, что вызывает анемию. Такое явление получило название резус-конфликт.

Резус-конфликт происходит во время беременности в том случае, если у матери резус отрицательный, а у ребенка - положительный. Это значит, что ребенок унаследовал резус-антиген от папы, а вероятность этого составляет 75%. При беременности резус-конфликт негативно влияет на здоровье плода и может вызвать тяжелые последствия.

Что можно сделать, если существует риск возникновения резус-конфликта?

Женщина с резус-отрицательным фактором всю беременность находится под пристальным наблюдением врача, который контролирует состояние плода. Чтобы избежать тяжелых осложнений, мать получает антирезус-иммуноглобулин, выводящий антитела против резуса ребенка. При отрицательном резусе беременной женщины профилактику ей проводят в любом случае.

Но если и у мамы, и у ребенка резус отрицательный, то резус-конфликта не будет. И в этом случае профилактические инъекции, а также дополнительные анализы и УЗ-исследования окажутся лишними.

До недавнего времени определить резус-фактор плода можно было, только взяв на исследование материал будущего ребенка. Эта инвазивная процедура небезопасна и для плода, и для матери, поэтому ее выполняют, только если имеются серьезные показания. Определение резус-фактора в список таких показаний не включено.

Медицинская наука не стоит на месте, постоянно появляются новые методы ранней диагностики плода. Наша компания предлагает неинвазивный метод пренатального определения резус-фактора будущего ребенка - по анализу крови женщины. Во время беременности ДНК ребенка попадает в кровоток мамы, и если у нее резус отрицательный, а у плода положительный, то анализ выявит ДНК-резус ребенка.

С помощью этого анализа можно достоверно определить, имеется ли резус-антиген у плода. А это, в свою очередь, позволит не проводить ненужное медикаментозное лечение при отрицательной резус-принадлежности ребенка, а профилактические инъекции иммуноглобулина назначать только при его положительном резусе.

Определение резус-фактора плода выполняется с использованием ПЦР в реальном времени - современного метода генетической диагностики. Достоверные результаты можно получить с 10-й недели беременности.

Благодаря исследованиям ученых по молекулярной генетике НИЛ клеточных технологий СЗГМУ им. И. И. Мечникова и Покровского банка стволовых клеток беременные женщины имеют уникальную возможность узнать резус-фактор будущего ребенка на самых ранних сроках.

Метод позволяет получить достоверные результаты, начиная с 10-й недели.

Тест предназначен для определения резус-принадлежности потенциальных реципиентов (обследование перед госпитализацией) и беременных или планирующих беременность женщин.

Резус (Rh) - одна из важнейших систем эритроцитарных антигенов (наряду с системой АВ0), клинически значимая не только для безопасного переливания крови, но и при ведении беременности (при оценке возможности возникновения резус-конфликта и риска развития гемолитической болезни плода и новорожденного).

Антиген RhD является наиболее иммуногенным* из антигенов системы резус, его наличие на поверхности эритроцитов обуславливает положительную резус-принадлежность. Наличие этого структурного белка мембраны эритроцитов является генетически наследуемым признаком. В составе антигена RhD выделяют структурные единицы – эпитопы (в настоящий момент определены 36 структурных единиц).

Резус-отрицательные пациенты развивают иммунный ответ, сопровождаемый выработкой антирезусных антител, при переливании им резус-положительной крови. Наличие анти-резус антител ведет к разрушению эритроцитов, несущих резус-антиген, и к тяжелым пост-гемотрансфузионным реакциям при повторных переливаниях резус-положительной крови резус-отрицательным реципиентам.

Аналогичный иммунный ответ может развивать резус-отрицательная женщина при беременности резус-положительным плодом. Несмотря на то, что обычно при беременности кровь плода не смешивается с кровью матери, в некоторых ситуациях (не первая по счету беременность, патологические состояния, связанные с изменением проницаемости плаценты, сенсибилизация после предшествующего переливания резус-положительной крови) иммунная система матери вырабатывает антитела к антигенам эритроцитов плода. Антитела разрушают резус-положительные эритроциты, что приводит к различным клиническим проявлениям (ранней потере плода, хроническому невынашиванию беременности) и к гемолитической болезни плода и новорожденных**.

У беременных женщин, имеющих резус-положительную принадлежность, проблем совместимости по резус-фактору с ребенком не возникает.

*Иммуногенность ‒ потенциальная способность антигена вызывать иммунный ответ (образование антител) у лиц, не имеющих этого антигена.

**Гемолитическая болезнь плода и новорожденных ‒ патологическое состояние плода или новорожденного, сопровождаемое гемолитической желтухой, анемией, нарушением рефлексов. Обусловлено иммунологическим конфликтом между матерью и плодом из-за несовместимости по эритроцитарным антигенам и связано с разрушением эритроцитов плода под действием антиэритроцитарных антител, поступающих через плаценту из крови матери в кровь ребенка. В большинстве случаев гемолитическая болезнь новорожденных обусловлена конфликтом по D-антигену. Но следует учесть, что возникновение данной патологии может быть обусловлено реакциями по АВ0-антигенам, а также несовместимостью по другим антигенам системы резус (С, Е, с, d, e) или М-, N-, Kell-, Duffy-, Kidd-антигенам (см. тест №15RH Rh (C, E, c, e), Kell – фенотипирование).

Оценка резус-принадлежности при беременности или подготовке к беременности, а также контроль наличия аллоиммунных антиэритроцитарных антител, включая антитела к RhD-антигену (см. тест № 140 Аллоиммунные антитела), важны для правильного ведения беременности резус-отрицательных женщин. Риск развития гемолитической болезни плода и новорожденного при повторных беременностях можно предотвратить своевременным введением Rh-иммуноглобулина.

Наследование резус-фактора

Генотип индивида состоит из двух гаплотипов, полученных по наследству: один от отца, другой от матери. Каждый гаплотип может обуславливать наличие антигенной детерминаты (D) или ее отсутствие (d). Доминантным является наличие антигенной детерминанты, следовательно:

Таким образом, у родителей с положительной резус-принадлежностью могут рождаться дети с отрицательной резус-принадлежностью:

В случае когда резус-принадлежность будущего ребенка требует определения, необходимо использовать генеалогический или генетический метод (см. тест №7207 Определение генотипа резус-фактора).

Проблемы в определении резус-принадлежности

Большая часть резус-положительных лиц экспрессируют достаточное количество антигенных детерминант, содержащих все эпитопы. В этом случае при определении резус-принадлежности, вне зависимости от используемых тест-систем, проблем не возникает, и резус-принадлежность четко определяется как положительная. Однако у ряда лиц (не более 1% в европейской популяции) при определении резус-принадлежности могут возникать сложности по следующим причинам:

1. Количество антигенных детерминант снижено в 3-10 раз, но структурно они не изменены. Такой вариант антигена называется слабым, D weak. Степень снижения количества детерминант разная, поэтому реакция агглютинации у таких пациентов может проходить с разной степенью выраженности.
2. Количество антигенных детерминант может быть обычным, но они структурно изменены. На детерминантах антигена D отсутствуют некоторые эпитопы (одновременно может отсутствовать до 5 эпитопов). Такой вариант антигена называется неполным, вариантным или частичным, D partial. У человека выявлено более 10 таких форм антигена D. Наиболее часто встречаемым является вариант антигена DVI (встречаемость не более 0,1% в европейской популяции).
3. Вариант резус-антигена D el характерен для азиатской популяции, встречаемость составляет до 30%. Проявляется очень низкой экспрессией антигена D на поверхности эритроцитов. Чаще всего обычными методами определяется как резус-отрицательный. С клинической точки зрения эти варианты важно отличать, особенно у женщин детородного возраста и при планировании переливания крови. При «неполном» варианте (D partial) возможно формирование антител к «полному» D антигену при переливании резус-положительной крови или гемокомпонентов. При «слабом» варианте (D weak) образование резус-антител маловероятно. Подход к выполнению исследования и к интерпретации результатов резус-принадлежности потенциальных реципиентов и потенциальных доноров отличается.

Обратите внимание, что лаборатория ИНВИТРО исследует биоматериал только потенциальных реципиентов. Обследование потенциальных и действующих доноров требует применения принципиально других тест-систем и производится только на станциях переливания крови.

Генетическое исследование, которое позволяет определить резус-фактор плода по крови резус-отрицательной беременной женщины методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией.

OMIM: MIM ID *111680

Локализация: 1p36.11

Синонимы русские

Ген RHD плода по анализу материнской крови, неинвазивное типирование гена RHD плода.

Синонимы английские

RhD (Rh blood group, D antigen); Rhesus blood group, D antigen, Fetal RHD typing, Noninvasive RHD typing, Cell-free fetal DNA testing.

Метод исследования

ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозная кровь (пробы ДНК, выделенные из плазмы крови матери).

Как правильно подготовиться к исследованию?

Специальной подготовки не требуется.

Подробнее об исследовании

Метод позволяет идентифицировать резус-фактор плода по крови матери уже с 10-й недели беременности.

С RhD-антигеном связана проблема сенсибилизации резус-отрицательных женщин резус-положительными эритроцитами плода, что может привести в дальнейшем к тяжелой патологии – гемолитической болезни новорожденных.

Принцип метода основан на выявлении гена RhD, который отвечает за синтез антигена D и есть только у резус-положительных людей. Резус-отрицательная женщина антигена D не имеет. Если ребенок оказался резус-отрицательным и в крови матери антиген D отсутствует, то тест будет отрицательным. Если же плод окажется резус-положительным, то в крови резус-отрицательной матери будет присутствовать ген RhD – тест будет положительным.

Среди более 100 Rh-антигенов наиболее иммуногенным и потому наиболее клинически значимым является RhD-антиген, с которым связано большинство осложнений, обусловленных резус-несовместимостью или резус-конфликтом.

Резус-фактор представляет собой белок, находящийся на поверхности эритроцитов (красных кровяных телец). Около 85% людей имеют резус-фактор и, таким образом, являются резус-положительными. У остальных 15% резус-фактор отсутствует, то есть они являются резус-отрицательными.

Резус-положительный тип определяется наличием гена RhD в гомозиготном (DD) или гетерозиготном (Dd) состоянии. Резус-отрицательный тип может быть обусловлен различными изменениями в структуре генов системы Rh. В большинстве случаев это делеция гена RhD на обеих хромосомах. При этом эритроцитарный антиген D не синтезируется и проявляется резус-отрицательный фенотип.

Резус-фактор наследуется как доминантный признак, поэтому у резус-отрицательной матери (dd) при генотипе DD резус-положительного отца ребенок всегда будет ресус-положительным, а это значит, что риск резус-конфликта высок. В случае геотипа Dd резус-положительного отца возможности рождения ребенка как с положительным, так и с отрицательным резусом одинаковы. К счастью, не у каждой резус-отрицательной беременной женщины плод является резус-положительным.

Схема наследования резус-фактора представлена в таблице:

Во время беременности, уже на первом месяце, в крови женщины начинает появляться фетальная (плодная, от англ. fetal – «плод») ДНК. В целом внеклеточные ДНК плода составляют 3-5% от всех циркулирующих в крови беременной внеклеточных ДНК при выделении их из плазмы.

Циркулирующие внеклеточные плодные ДНК – это короткие участки плодных нуклеиновых кислот, циркулирующих в материнской плазме и сыворотке, которые наблюдаются иногда в несвязанной форме, свободными от обычных клеточных компонентов.

Если во время беременности резус-отрицательной женщины от резус-положительного мужчины ребенок унаследует резус-фактор от отца, тогда иммунная система матери начнет воспринимать плод как чужеродный и станет вырабатывать антитела. В организме резус-отрицательной беременной женщины в ответ на положительный резус-фактор плода начинают вырабатываться антитела и возникает опасность резус-конфликта. Резус-антитела матери проникают в плаценту и разрушают эритроциты малыша. Печень и селезенка ребенка начинают производить эритроциты в усиленном режиме, из-за чего увеличиваются в размере; постепенно развивается гемолитическая болезнь. Резус-конфликт может быть причиной поражения головного мозга, нарушения функции слуха и речи, а в самых тяжелых случаях – проявляться водянкой (отеком) плода, которая смертельно опасна.

Общими проявлениями резус-конфликта у плода являются анемия, ретикулоцитоз, эритробластоз, гепато- и спленомегалия, гипоксическое поражение важных органов. Тяжесть проявлений резус-конфликта может определяться количеством антирезусных антител в крови матери и степенью зрелости ребенка.

Для чего используется исследование?

• Для определения резус-статуса (Rh или Rh-) плода.

Когда назначается исследование?

• При отрицательном резус-факторе беременной, супруг которой является резус-положительным.

Что означают результаты?

Положительный результат:

• резус-положительный плод.

Отрицательный результат:

• резус-отрицательный плод.

Что может влиять на результат?

В каких случаях тест может быть недостоверным:

• положительный резус-фактор матери;
• срок беременности менее 10 недель;
• предыдущая беременность была менее 3 месяцев назад до настоящей.

Кто назначает исследование?

Акушер-гинеколог, врач общей практики.

• Беременность — Пренатальный скрининг трисомий I триместра беременности (синдром Дауна)
• Беременность — Пренатальный скрининг трисомий II триместра беременности
• Беременность — I триместр
• Беременность — II триместр
• Беременность — III триместр

Литература

• Современные методы диагностики, лечения гемолитической болезни плода и новорождённого при резус-сенсибилизации: пособие для врачей / Г. М. Савельева, М. А. Курцер, О. Б. Панина, Л. Г. Сичинава, Р. И. Шалина, П. А. Клименко, А. Г. Коноплянников и др. – М.: Изд-во МЗ РФ, 2004.
• Daniels G., Hadley A., Soothill P. Blood group antibodies in haemolytic disease of the fetus and newborn // Alloimmune disorders of pregnancy. University Press. – 2002.
• Lo Y.M., Hjelm N.M., Fidler C. et al. Prenatal diagnosis of fetal RhD status by molecular analysis of maternal plasma // N Engl J Med. – 1998.
• Bennett, P. R., Le Van Kim, C., Colin, Y., Warwick, R. M., Cherif-Zahar, B., Fisk, N. M., Cartron, J.-P. Prenatal determination of fetal RhD type by DNA amplification. 1993.
• Wagner, F. F., Gassner, C., Muller, T. H., Schonitzer, D., Schunter, F., Flegel, W. A. Molecular basis of weak D phenotypes. 1999.

Неинвазивные пренатальные молекулярно-генетические исследования по определению

резус-фактора и пола плода методом ПЦР в режиме "реального времени".

1. Неинвазивные пренатальные молекулярно-генетические исследования.

В акушерско-гинекологической практике часто возникает необходимость определения генотипа плода на ранних сроках беременности, начиная с 8-10 недель. До недавнего времени материалдля этих исследований получали инвазивно, при хорион-, плацентобиопсиии в ходе амнио- и кордоцентеза. Риск самопроизвольного прерывания беременности при этих мероприятиях составляет 2-3%. Открытие в 2002г. циркуляции нуклеиновых кислот плода в материнской крови послужило основой для развития неинвазивной пренатальной диагностики.

В отличие от прежних методов, неинвазивные пренатальные молекулярно-генетические исследования по определению резус-фактора и пола плода методом ПЦР в режиме "реального времени" не представляют угрозы течению беременности, т.к. материалом для исследования служит кровь матери. В связи с тем, что метод ПЦР в режиме "реального времени" является одним из самых точных и высокочувствительных современных методов исследований, определение пола и резус-фактора плода стало возможно на ранних сроках беременности, начиная с 6-8 недель - момента формирования кровеносной системы плода. Матрицей для предлагаемых исследований служит ДНК плода (фетальная ДНК), большая часть которой находится в материнской плазме в виде коротких фрагментов. Количество фетальной ДНК увеличивается в течение беременности и зависит от состояния плаценты. Достоверность исследования высока - 96-98% уже на сроке 8-10 недель беременности.

2. Определение резус-фактора плода.

Резус-фактор - это белковый антигенный комплекс на поверхности эритроцитов. В системе резус различают пять антигенов. Наиболее иммуногенным является антиген D, присутствие которого и определяет положительный резус-фактор (Rh+). Распространенность резус-положительных лиц, носителей антигена D, в европейской популяции составляет около 86%, соответственно, доля резус-отрицательных лиц (Rh-), не имеющих антигена D - около 14%.

Если резус-отрицательная (Rh-) женщина беременна резус-положительным (Rh+) плодом, её иммунная система начинает вырабатывать анти-D-антитела, вызывающие разрушение эритроцитов плода. Как правило, анти-D-антитела отсутствуют при первой беременности Rh+ плодом, протекающей без осложнений, однако сенсибилизация матери возникает в процессе родов. При каждой последующей беременности или при повреждении плаценты увеличивается риск развития гемолитической болезни плода. 98% случаев гемолитической болезни новорожденных связаны именно с D-резус-антигеном. При раннем проявлении резус-конфликт может стать причиной нарушения развития плода, преждевременных родов или выкидышей.

Так как антирезусную профилактику иммуноглобулином человека рекомендовано проводить на 28 неделе первой и последующих беременностей, то определение резус-фактора плода на ранних сроках является необходимым. Определение Rh- плода в 1-2 триместре беременности позволит сократить расходы на регулярное определение титра анти-D-антител и антирезусную профилактику.

Таким образом, при ведении беременности у Rh- пациентки необходимо определение резус-статуса плода для своевременного расчета риска развития резус-конфликта и проведения профилактических мероприятий.

3. Определение пола плода.

Выяснение пола плода в первом - начале второго триместра может предотвратить случаи рождения больных детей в семьях с отягощённой наследственностью. Возможно прерывание беременности по медицинским показаниям при наличии у родителей носительства генов заболеваний, сцепленных с полом (например, гемофилия или прогрессирующая мышечная дистрофия ДюшеннаБеккера - у матери или азооспермия - у отца). Также врачу важно знать пол плода для принятия решения о возможности гормональной терапии беременной при гиперандрогении надпочечникового генеза (врождённая дисплазия коры надпочечников, ВДКН). Основным методом пренатального установления пола будущего ребенка сейчас является ультразвуковая диагностика, однако на ранних сроках беременности этот метод не всегда корректен и часто субъективен.

4. Неинвазивные пренатальные молекулярно-генетические исследования по определению резус-фактора и пола плода методом ПЦР в режиме "реального времени" показаны следующим группам беременных:

всем резус-отрицательным женщинам;

резус-отрицательным женщинам перед абортом, с целью определения наличия возможности возникновения резус-конфликта при повторных беременностях;

женщинам с ВДКН для коррекции проведения лекарственной терапии;

женщинам с возможным носительством гена гемофилии и других заболеваний, сцепленных с полом;

заполнение в направлении всех соответствующих исследованию пунктов.

В акушерской практике может возникать потребность в определении фенотипа резус-фактора будущего ребенка в раннем периоде беременности (начиная с 8-ой недели). Раньше биологический материал для генетического исследования получали при биопсии плаценты и хориона, пункции околоплодного пузыря и забора крови из пуповины плода. Однако медицинская отрасль не стоит на одном месте, современные специфичные и высокочувствительные методы молекулярно-генетической диагностики позволяют определить эритроцитарный антиген Rh плода неинвазивным пренатальным способом.

Белок, находящийся на поверхности красных клеток крови (эритроцитов), называется резус-фактором (Rh+) , его наличие - генетически наследуемый признак. Отсутствие данного структурного белка характерно для отрицательного резус-фактора (Rh- ). Система эритроцитарных антигенов наряду с системой групп крови имеет клиническое значение для безопасных гемотрансфузий и ведения периода вынашивания будущего ребенка при:

• оценивании риска развития резус-конфликта;
• диагностировании эритробластоза плода;
• выявлении гемолитической болезни новорожденного.

Когда назначают анализ

Показаниями для проведения анализа определения резус-фактора плода (с 8 недели беременности) являются:

• подготовка к оперативному вмешательству;
• решение вопроса о введении матери антирезусного иммуноглобулина;
• оценка возможности возникновения резус-конфликта - беременность у резус-отрицательной женщины при наличии положительного резуса у отца ребенка;
• изо-иммунная гемолитическая анемия, (гемолитическая болезнь новорожденных), развивающаяся при несовместимости крови ребенка и матери по Rh.

Методика проведения анализа

Молекулярно-генетические исследования проводятся в компетентном лабораторном центре, биологический материал - кровь из вены. Забор производится в утреннее время, сложной подготовки к процедуре не требуется, накануне необходимо воздержаться от пищевой нагрузки и сдавать кровь строго натощак.

Резус-фактор плода определяется по фрагментам специфической ДНК будущего ребенка в материнской сыворотке с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. В основе исследования лежит выявление гена RHD, кодирующего суб-фенотипический D-антиген (положительная резус-принадлежность обусловлена его наличием на поверхности мембран эритроцитов).

Расшифровка анализа

Отрицательный результат исследования (RHD-ОТР.) указывает на высокую вероятность резус-отрицательного статуса плода . Для подтверждения данных квалифицированные специалисты - генетики, гематологи рекомендуют повторить тест на 25-26 неделе беременности.

При положительном результате (RHD+ПОЛ. ) практикующие акушер-гинекологи принимают решение о введении в организм пациентки определенной дозы антирезусного иммуноглобулина .